Раздел 1

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ ЧЕЛОВЕКА

1.3. Онтогенетический уровень организации жизни

1.3.2. Основы генетики человека

1.3.2.17. Методы изучения наследственности человека

Молекулярно-генетические методы

Это разнообразная группа методов, применяются для выявления вариаций в структуре исследуемого участка ДНК, а также для расшифровки первичной последовательности оснований. Эти методы основываются на "манипуляциях" с ДНК и РНК.

Основные этапы молекулярно-генетических методов:

1. Получение образцов ДНК или РНК - исходной этап всех методов. Источником геномной ДНК любой клетки, имеющие ядро. Чаще используют периферийную кровь (лейкоциты), хорион, амніотичн; клетки культуры фибробластов. Основная задача - накопление необходимой количества определенных фрагментов ДНК. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - это метод амплификации ДНК в условиях in vitro. Соответствующее к нуклеотидной последовательности концов досліджувано: участки применяют два олигонуклеотидных прай - мэры (приманки). Длина праймеров 20-30 нуклео - тидів. Процесс амплификации заключается в осуществлении повторяющихся циклов (рис. 1.130).

Рис. 1.130. Принцип полимеразной цепной реакции.

2. Рестрикция ДНК на фрагменты по помощью рестриктаз. Основное их свойство - разрывать двухцепную ДНК в определенных последовательностях нуклеотидов. Рестриктазы - ферменты, выделенные из бактериальных клеток, разрезают молекулу ДНК на фрагменты в определенных местах. Применение этих ферментов дает возможность получить достаточно короткие фрагменты ДНК, в которых легко можно определить последовательность нуклеотидов. Разработка метода обратной транскрипции ДНК в молекулах мРНК определенных белков с последующим клонированием этих ДНК привела к появлению ДНК-зондов. Использование таких зондов для гибридизации с ДНК-клеток пациента дает возможность точно локализовать генную мутацию.

3. Электрофорез фрагментов ДНК. Каждый фрагмент ДНК занимает определенное место в виде дискретной полосы в конкретном месте геля.

4. Визуализация и идентификация фрагменте! ДНК в геле.

Разработаны и другие методы выявления специфических фрагментов ДНК с помощью блот-гибридизации по Саузерном.